怎樣用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)乙酰膽堿受體抗體？

2018-04-16 來(lái)源：中山市中醫(yī)院心胸外科、東方和諧心胸標(biāo)簽：掌上醫(yī)生喝茶減肥一天瘦一斤安全減肥 cps聯(lián)盟美容護(hù)膚

摘要： B加入乙酰膽堿受體：每支乙酰膽堿受體干粉加蒸餾水04ml混勻。再1∶10稀釋備用。10μl（1∶10R）+10mlPBS-T混勻，每孔100μl，37℃1h。PBS-T洗3次，每次3min。

（1）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的簡(jiǎn)要原理

先用α-銀環(huán)蛇毒素包被于塑料板上4℃冰箱過(guò)夜。加乙酰膽堿受體，由于乙酰膽堿受體與α-銀環(huán)蛇毒素之間特異性、不可逆性結(jié)合而使乙酰膽堿受體也間接結(jié)合于塑料板上。加標(biāo)準(zhǔn)抗血清或待測(cè)血清，若有乙酰膽堿受體抗體，通過(guò)乙酰膽堿受體抗體與乙酰膽堿受體間特異性結(jié)合而固定于塑料板上。加酶標(biāo)的二抗、顯色。有顏色的地方就是有二抗的地方，可由顏色的深淺來(lái)反映標(biāo)本中乙酰膽堿受體抗體的含量多少。

（2）酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定乙酰膽堿受體抗體的程序

A包被：用α-銀環(huán)蛇毒素（1mg/ml）10μl+包被液10ml，每孔100μl，24h4℃保存，PBS-T洗3次，每次3min。

B加入乙酰膽堿受體：每支乙酰膽堿受體干粉加蒸餾水04ml混勻。再1∶10稀釋備用。10μl（1∶10R）+10mlPBS-T混勻，每孔100μl，37℃1h。PBS-T洗3次，每次3min。

C血清及乙酰膽堿受體抗體工作標(biāo)準(zhǔn)：病人血清或稀釋的乙酰膽堿受體抗體工作標(biāo)準(zhǔn)液，每孔100μl，37℃30min。PBS-T洗3次，每次3min。

D結(jié)合物：辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG結(jié)合物，每支溶于05ml蒸餾水中。取其溶解物30μl結(jié)合物加15mlPBS-T混勻，每孔100μl，37℃30min。PBS-T洗3次。

E底物：鄰苯二胺4mg+底物緩沖液10ml+3％過(guò)氧化氫15μl（用時(shí)現(xiàn)配）每孔100μl，暗處37℃5min。

F終止：2mol/LH2SO4，每孔50μl。

G測(cè)OD：490nm波長(zhǎng)下檢測(cè)OD值。

（3）乙酰膽堿受體抗體測(cè)定中ELISA試驗(yàn)緩沖液的配制

①包被液：pH96，Na2CO3159g，NaHCO3293g，蒸餾水加到1000ml，4℃保存。

②PHS-T：pH74，KH2PO402g，Na2HPO4·12H2O29g，NaCl80g，KCl02g，Tween-2005ml，蒸餾水加至1000ml，4℃保存。

③底物緩沖液