有報道
惡性腫瘤病人在用α-
干擾素(interferon-α,INF-α)治療期間出現(xiàn)自身免疫性重癥
肌無力。還有一些慢性丙型肝炎病人在用INF-α治療后發(fā)生重癥肌無力。有人用INF-α治療實驗性變態(tài)反應(yīng)性重癥肌無力有效而建議應(yīng)該用INF-α治療重癥肌無力。還有報道有易患重癥肌無力
遺傳素質(zhì)的丙型肝炎病人在用INF-α治療期間發(fā)生嚴(yán)重重癥肌無力。一般建議對有家族性重癥肌無力證據(jù)的病人應(yīng)不用或慎用INF-α。
怎樣自人腓腸肌提取乙酰膽堿受體?
(1)乙酰膽堿受體的提取
A腓腸肌去除結(jié)締組織后稱重15~30g,把肌肉分裝入若干管內(nèi),每管內(nèi)裝肌肉25g。
B每管內(nèi)加入1mol/LKBr(5ml/g)和MSF(1μl/g)。放入勻漿器內(nèi)勻漿。每次勻漿45s停15s,重復(fù)3次。
C勻漿經(jīng)尼龍網(wǎng)過濾,每管用1mol/LKBr(5ml/g)沖洗。
D5000g離心10min。用1mol/LKBr(5ml/g)和MSF(1μl/g)使之再懸浮。
E5000g離心10min。用2%(W/V)tritonX-100(2ml/g)和MSF(1μl/g)使之再懸浮。在Vortex上振動使之混勻。用parafilm封口后置4℃孵育過夜。
F39000g離心30min,棄沉淀,取上清液經(jīng)WhatmanGF/B玻璃纖維過濾。把過濾液置于已經(jīng)用緩沖液A平衡了的50mlHTP柱上。(留1~2ml作為乙酰膽堿受體的粗制品)。
G用緩沖液A沖洗,每次22ml。按組分收集,直至緩沖液變清。
H每一組分洗液測OD280值。
I用后清洗HTP柱:配制2mol/LK2HPO4液。用雙蒸水洗2次或3次,每次半小時。用2mol/L的K2HPO4洗2或3次。再用雙蒸水洗2或3次。用緩沖液A來平衡,并用緩沖液A來保存。
(2)所需液體的制備
A制備HTP:稱HTP粉,并用含1%tritonX-100的PBS使之充脹,半小時內(nèi)洗3~4次,把細(xì)顆粒洗掉。用2gHTP做3柱。
B緩沖液A(用于為HTP柱洗去雜蛋白)
01mol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl,1mmol/L
EDTA,002%NaN3,1%TritonX-100
01mol/LNaCl(分子量為5844):5844g/L
10mmol/LTris-HCl(分子量為12114):12114g/L(用HCl把pH調(diào)節(jié)到74)
1mmol/LEDTA(無水EDTA的分子量為3362)。每升中含20mmol/L溶液50ml
002%NaN3:每升中含2%NaN310ml
1%TritonX-100:每升中含20%TritonX-100溶液50ml
C緩沖液B(用于為HTP柱洗去雜蛋白)
150mmol/LPO4pH=74,1%Triton,002%NaN3,1mmol/LEDTA
150mmol/LPO4pH=74
每升中含02mol/LNaH2PO41425ml
每升中含02mol/LNaH2PO46055ml
1%TritonX-100:每升中含20%TritonX-100500ml
002%NaN3:2%NaN31ml
1mmol/LEDTA:每升中含20mmol/LEDTA50ml
42mol/LK2HPO4
一面攪拌,一面把17418gK2HPO4逐漸加入500ml溫?zé)岬碾p蒸水中。