骨質(zhì)疏松癥是一種全身性、代謝性骨骼系統(tǒng)疾病，其病理特征為骨量降低、骨微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增加，骨強(qiáng)度下降，易發(fā)生骨折；與年齡、性別、種族等因素密切相關(guān)，絕經(jīng)后婦女多發(fā)。絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松（POP）是由于婦女絕經(jīng)后，卵巢功能衰退，體內(nèi)雌激素水平隨之下降，雌激素的骨骼效應(yīng)消除后，破骨細(xì)胞的骨吸收大于成骨細(xì)胞的骨形成作用導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松。近年來(lái)，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林可提高老年人的骨密度，從而推斷其可治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，在此方面，實(shí)驗(yàn)研究取得了一定進(jìn)展。阿司匹林是一種老藥，不但副作用較少、廉價(jià)，而且治療疾病的范圍廣。因此探討阿司匹林對(duì)骨質(zhì)疏松的作用及其機(jī)制意義重大，筆者將對(duì)阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展做一綜述。

　　POP動(dòng)物模型的構(gòu)建

　　目前構(gòu)建POP的動(dòng)物模型多使用Sprague-Dawley（SD）或者Wistar雌性大鼠，在適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)條件下適應(yīng)一段時(shí)間，通過(guò)摘除雙側(cè)卵巢模擬女性絕經(jīng)，摘除卵巢后的雌性大鼠，因雌激素下降，形成以松質(zhì)骨丟失為主的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥，這一特點(diǎn)與臨床絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的病理機(jī)制相似。

　　阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究

　　1、在體實(shí)驗(yàn)

　　在體實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，阿司匹林對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度、骨組織形態(tài)學(xué)及骨生物力學(xué)、骨代謝指標(biāo)等均有調(diào)節(jié)作用。

　?。?）提高骨密度

　　Yamaza等用低劑量阿司匹林研究其對(duì)去勢(shì)鼠的骨密度影響。對(duì)3月齡的去勢(shì)鼠進(jìn)行為期3個(gè)月低劑量阿司匹林治療，然后使用顯微CT分析發(fā)現(xiàn)，阿司匹林治療組顯著改善去勢(shì)小鼠骨小梁和皮質(zhì)骨密度。

　　Chen等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討阿司匹林對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的治療作用。將40只3月齡SD雌性大鼠隨機(jī)分成5組:對(duì)照組(Sham)、去勢(shì)組(OVX)及3個(gè)阿司匹林治療組(Aspirin)。OVX及Aspirin組采用卵巢切除法去勢(shì),飼養(yǎng)3個(gè)月建立骨質(zhì)疏松模型。3個(gè)阿司匹林治療組分別為8.93、26.79及80.36mg/kg(A1、A2及A3)，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃3個(gè)月，Sham組和 OVX 組每天用等量的生理鹽水灌胃3個(gè)月。雙能X線(xiàn)吸收骨密度測(cè)量?jī)x(DXA)及Micro-CT測(cè)量結(jié)果顯示：3個(gè)阿司匹林治療組腰4椎體骨密度、骨小梁厚度、骨小梁數(shù)量均顯著高于OVX組,且與Sham組相近。表明阿司匹林可以有效地促進(jìn)大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松骨小梁的改建,改善骨小梁的三維結(jié)構(gòu),增加骨質(zhì)的骨密度。

　　Huang等通過(guò)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合模型，探討阿司匹林對(duì)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的影響。將60只3月齡雌性Wistar大鼠，隨機(jī)分成去勢(shì)組50只，假手術(shù)組5只和空白組5只，構(gòu)建去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松模型。確認(rèn)模型成功后，將去勢(shì)組大鼠全部造成左側(cè)股骨中點(diǎn)骨折，用克氏針?biāo)鑳?nèi)固定。再將制成骨折模型的50只大鼠，隨機(jī)分成A組和B組(每組25只)，A組給予阿司匹林灌胃，33mg/次，1次/d，B組給予等量生理鹽水。兩組分別于骨折術(shù)后測(cè)定骨密度值，然后處死取骨痂，行骨痂組織學(xué)檢查，8、12周行放射學(xué)觀察。兩組剩余的5只大鼠于12周時(shí)行左股骨生物力學(xué)測(cè)定。結(jié)果顯示阿司匹林組各時(shí)間點(diǎn)骨密度均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　?。?）改善骨組織形態(tài)學(xué)及骨生物力學(xué)

　　Chen等通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)阿司匹林可以有效地促進(jìn)大鼠絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松骨小梁的改建,改善骨小梁的三維結(jié)構(gòu),增加骨質(zhì)的骨密度和力學(xué)強(qiáng)度。HUANG等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，組織學(xué)觀察到HE染色,阿司匹林組軟骨內(nèi)成骨過(guò)程較對(duì)照組加快;生物力學(xué)測(cè)定顯示，術(shù)后12周,阿司匹林組左側(cè)股骨的三點(diǎn)彎曲載荷高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從而證明阿司匹林能夠促進(jìn)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合,增加骨質(zhì)的骨密度和生物力學(xué)強(qiáng)度。

　　Yao等觀察阿司匹林對(duì)于趨勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的影響，探究不同劑量及不同時(shí)期口服阿司匹林對(duì)骨質(zhì)疏松的輔助治療作用。取42只6個(gè)月齡的雌性wistar大鼠,隨機(jī)選取6只作為假手術(shù)組(A),余36只作為去勢(shì)組。去勢(shì)組分為阿司匹林預(yù)防組:去勢(shì)對(duì)照組(B),去勢(shì)阿司匹林(8.92 mg/kg)組(C),去勢(shì)阿司匹林(26.75 mg/kg)組(D)和阿司匹林治療組:去勢(shì)對(duì)照(E),阿司匹林(8.92 mg/kg)組(F),阿司匹林組(26.75 mg/kg)組(G)。預(yù)防組于去勢(shì)后3 d給予不同劑量阿司匹林灌胃,治療組于去勢(shì)后12周灌胃。對(duì)42只大鼠雙側(cè)股骨干進(jìn)行取材,對(duì)雙側(cè)股骨干行生物力學(xué)測(cè)定。結(jié)果顯示預(yù)防部分與治療部分的去勢(shì)對(duì)照組較假手術(shù)組、去勢(shì)8.92 mg/kg組及去勢(shì)26.75 mg/kg的三點(diǎn)彎曲載荷顯著降低。預(yù)防組與治療組同劑量間比較,預(yù)防組的最大破壞應(yīng)力指標(biāo)高于治療組。表明早期應(yīng)用阿司匹林能增加去勢(shì)大鼠的骨密度,增加骨質(zhì)生物力學(xué)強(qiáng)度。

　　Wang等研究阿司匹林對(duì)去勢(shì)大鼠腰椎微觀結(jié)構(gòu)的影響。取48只3月齡SD雌性大鼠隨機(jī)分為6組:去勢(shì)組(OVX組)、對(duì)照組(Sham組)及4個(gè)阿司匹林治療組(Aspirin組),每組8只。OVX組及Aspirin組采用卵巢切除法建立骨質(zhì)疏松模型。去勢(shì)后1周,阿司匹林治療組劑量分別為2.25、4.46、8.92及26.75 mg/kg(A1、A2、A3及A4組),每天灌胃一次,OVX組及Sham組予同等量生理鹽水灌胃。灌胃3個(gè)月后處死取腰椎椎體,以Micro-CT進(jìn)行測(cè)量分析。Micro-CT分析表明:與OVX組比較,阿司匹林各劑量組骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）、骨密度（BMD）均顯著性提高,骨表面積骨體積比（BS/BV）、骨小梁分離度（Tb.Sp）顯著性降低,阿司匹林各劑量組BV/TV、BS/BV、Tb.Th、Tb.N、Tb.Sp、BMD與Sham組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明阿司匹林可以改善去勢(shì)大鼠骨小梁結(jié)構(gòu),增加骨質(zhì)密度,對(duì)去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松具有防治作用。

　?。?）改善骨代謝生化指標(biāo)

　　Wang等研究阿司匹林預(yù)防去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松的作用及機(jī)制。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及干預(yù)同文獻(xiàn)，去勢(shì)大鼠灌胃3個(gè)月后觀察血清骨源性堿性磷酸酶及骨鈣素水平。結(jié)果顯示與OVX組比較,8.92及26.75 mg/kg劑量阿司匹林組骨源性堿性磷酸酶顯著降低。4.46、8.92及26.75 mg/kg劑量阿司匹林組骨鈣素與Sham組相比顯著升高。提示阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的發(fā)生機(jī)制可能是通過(guò)抑制骨吸收及刺激骨形成發(fā)揮作用。

　?。?）調(diào)節(jié)相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)

　　Yang等探討阿司匹林對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松模型鼠體內(nèi)白細(xì)胞介素-1(IL-1)、IL-6、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)表達(dá)的影響,以及其防治骨質(zhì)疏松的作用。選取Sprague-Dawley大鼠60只,隨機(jī)分為對(duì)照組(10只)和去卵巢模型組(50只),術(shù)后1周去卵巢模型組大鼠再隨機(jī)分為骨質(zhì)疏松組,其中A組(0.25 mmol/L阿司匹林)、B組(0.5 mmol/L)、C組(1.0 mmol/L)和D組(1.5 mmol/L),各10只。檢測(cè)各組血清和骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平,同時(shí)采用Micro-CT對(duì)骨小梁微觀三維形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果骨質(zhì)疏松組血清IL-1,IL-6,TNF-α,M-CSF分別為(80.15±7.18)pg/m L、(82.16±6.63)pg/m L、(30.21±4.73)pg/m L和(11.42±4.25)pg/m L,均明顯高于對(duì)照組。A,B,C,D組中,D組IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低。骨質(zhì)疏松組骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF分別為(71.24±8.10)pg/m L、(78.02±5.15)pg/m L、(26.92±3.23)pg/m L和(10.22±3.15)pg/m L,均明顯高于對(duì)照組；A,B,C,D組中,D組IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF水平最低。提示阿司匹林能抑制去勢(shì)大鼠骨流失,這可能與阿司匹林抑制大鼠血清和骨組織IL-1,IL-6,TNF-α和M-CSF的表達(dá)有關(guān),從而使破骨活動(dòng)減弱的作用。

　　2、離體實(shí)驗(yàn)

　?。?）促進(jìn)成骨細(xì)胞表達(dá)

　　Feng等通過(guò)體外試驗(yàn)研究阿司匹林對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞成骨性分化的影響。培養(yǎng)SD大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs),傳代3次后進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)培養(yǎng)基中加入不同濃度阿司匹林(0.5、1、2、5、10mmol/L),同時(shí)設(shè)立對(duì)照組。采用cck-8法分析細(xì)胞增殖情況。比較阿司匹林組與對(duì)照組在細(xì)胞堿性磷酸酶(ALP)活性、骨鈣素(OC)分泌量、鈣結(jié)節(jié)染色等方面的成骨性差異。結(jié)果顯示阿司匹林無(wú)促進(jìn)細(xì)胞增殖活性,而高濃度阿司匹林能夠強(qiáng)烈抑制細(xì)胞增殖。0.5、1、2mmol/L濃度阿司匹林可促進(jìn)BMSCs的成骨性分化,中低濃度組堿性磷酸酶含量、骨鈣素分泌量在不同階段顯著高于對(duì)照組。14天茜素紅染色可見(jiàn)中低濃度組鈣結(jié)節(jié)數(shù)量高于對(duì)照組。提示中低濃度阿司匹林作用于骨髓基質(zhì)細(xì)胞可促進(jìn)其成骨細(xì)胞特性表達(dá),表明阿司匹林有促進(jìn)骨代謝合成的作用。

　?。?）抑制破骨細(xì)胞分化成熟

　　Zhang等研究不同濃度阿司匹林對(duì)體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞(Osteoclast,OC)分化成熟及骨吸收活性的影響。建立由核激活因子受體配體(RANKL)和巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)共同作用的大鼠破骨細(xì)胞骨髓誘導(dǎo)體系,將雌激素和不同濃度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)分別作用于破骨細(xì)胞。誘導(dǎo)培養(yǎng)后分別對(duì)破骨細(xì)胞進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,觀察細(xì)胞形態(tài),并計(jì)數(shù)破骨樣細(xì)胞數(shù)量;將各組破骨細(xì)胞接種于骨磨片上,建立破骨細(xì)胞-骨磨片活性分析模型,于不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)骨磨片進(jìn)行光鏡和掃描電鏡觀察,分析計(jì)算骨吸收陷窩面積。結(jié)果顯示隨著阿司匹林濃度的增加,阿司匹林組TRAP陽(yáng)性多核破骨細(xì)胞數(shù)量、骨吸收陷窩面積逐漸減少直至消失。與雌激素組相比,低濃度阿司匹林組(0.25mmol/L)沒(méi)有明顯差異;但中、高濃度阿司匹林實(shí)驗(yàn)組(0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L)破骨細(xì)胞數(shù)量和骨吸收陷窩面積減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明阿司匹林可抑制破骨細(xì)胞的分化成熟及骨吸收功能,且呈劑量依賴(lài)性。

　　（3）抑制破骨細(xì)胞RANK表達(dá)

　　Zhang等體外試驗(yàn)研究不同濃度阿司匹林對(duì)體外培養(yǎng)大鼠破骨細(xì)胞(OC)RANK(核因子κB受體活化因子)表達(dá)的影響。采用RANKL和M-CSF誘導(dǎo)大鼠骨髓單核巨噬細(xì)胞破骨分化模型,給予不同濃度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)和雌激素處理,而后進(jìn)行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色觀察細(xì)胞形態(tài)特征,掃描電鏡觀察骨磨片破骨細(xì)胞骨吸收陷窩,RT-PCR技術(shù)檢測(cè)破骨細(xì)胞表面RANK基因的表達(dá),ELISA法檢測(cè)RANK蛋白的表達(dá)。結(jié)果示阿司匹林和雌激素都可以使大鼠破骨細(xì)胞成熟分化程度和骨吸收活性降低,抑制破骨細(xì)胞RANK基因和蛋白的表達(dá),且阿司匹林的抑制作用具有劑量依賴(lài)性。表明阿司匹林對(duì)大鼠破骨細(xì)胞RANK的表達(dá)有抑制作用且呈劑量依賴(lài)性,從而抑制破骨細(xì)胞的成熟分化及骨吸收功能。

　?。?）抑制破骨細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通道

　　Zeng等通過(guò)離體實(shí)驗(yàn)探討阿司匹林對(duì)破骨細(xì)胞生成的影響及其分子機(jī)制。體外培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,以100 ng/ml核激活因子κB(NF-κB)受體配體(RANKL)誘導(dǎo)培養(yǎng),并同時(shí)添加不同溶度的阿司匹林(0,0.25,0.5,1.0,1.5 mmol/L)培養(yǎng)5天。在不同時(shí)間點(diǎn),通過(guò)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色的方法來(lái)觀察破骨細(xì)胞誘導(dǎo)生成能力,用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)其破骨細(xì)胞系標(biāo)志基因,包括組織蛋白酶K(CTSK)、TRAP、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和降鈣素受體(CTR)mRNA的表達(dá)。裂解不同培養(yǎng)條件的細(xì)胞并提取蛋白上樣,行western印跡檢測(cè)NF-κB通道蛋白的表達(dá)以及有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPKS)通道蛋白的表達(dá),通過(guò)免疫熒光的方法分析確定NF-κB的P65的核易位。結(jié)果顯示阿司匹林抑制RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞生成,隨著阿司匹林濃度增加,破骨細(xì)胞形成數(shù)量明顯減少；其標(biāo)志性基因TRAP、CTSK、MMP9及CTR的mRNA表達(dá)均有所下調(diào)；磷酸化的P65、P50、IKB-a、P38以及氨基端激酶(C-JNK)和胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)蛋白表達(dá)均有所減少,而其非磷酸化的蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化。阿司匹林同時(shí)對(duì)NF-KB P65的核易位也表現(xiàn)出抑制效果。表明在RAW264.7細(xì)胞系中,阿司匹林通過(guò)抑制NF-κB系統(tǒng)(P65、P50、IKB-a)和MAPKS系統(tǒng)(P38、C-JNK和ERK)通道的激活來(lái)抑制破骨細(xì)胞的生成,從而發(fā)揮治療骨質(zhì)疏松的作用，且在一定范圍內(nèi)和阿司匹林濃度呈正相關(guān)。

　　小  結(jié)

　　大量動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)及離體實(shí)驗(yàn)研究表明，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥療效肯定，主要表現(xiàn)為阿司匹林可提高去勢(shì)大鼠骨密度值，顯著改善骨組織形態(tài)學(xué)、骨生物力學(xué)、骨代謝生化指標(biāo)、骨代謝密切相關(guān)的細(xì)胞因子水平，影響骨質(zhì)疏松發(fā)生機(jī)制的信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)。且阿司匹林治療骨質(zhì)疏松具有雙向良性調(diào)節(jié)作用，既可達(dá)到與外源性雌激素相同的效果，又可避免外源性雌激素過(guò)量所出現(xiàn)的副作用。

　　近年來(lái)，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)雖然取得了較大進(jìn)展，但尚存在以下問(wèn)題：第一，阿司匹林治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用機(jī)理尚未完全闡明，目前已從骨代謝、細(xì)胞因子水平及破骨細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志基因表達(dá)水平等方面對(duì)其作用機(jī)制做了初步探討，下一步可繼續(xù)從破骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路、基因水平等方面入手進(jìn)行更深入的研究，以揭示阿司匹林促進(jìn)骨形成、抑制骨吸收的效應(yīng)機(jī)制。第二，仍需進(jìn)一步通過(guò)流行病學(xué)確定阿司匹林治療骨質(zhì)疏松的劑量多少及療程多長(zhǎng)才能達(dá)到有佳療效。從而為阿司匹林這一老藥治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供更多的研究基礎(chǔ)。