梅毒是由梅毒螺旋體（Treponemapallidum，TP）引起的一種慢性全身性感染的性傳播疾病，是經(jīng)典的性病之一。梅毒可以引起人體幾乎所有的組織和器官的損壞和病變，產(chǎn)生多種多樣的癥狀和體征，如一期梅毒的硬下疳；二期梅毒的皮膚粘膜損害；三期梅毒的神經(jīng)、心血管損害。另一方面，梅毒又可以多年無臨床表現(xiàn)而呈潛伏狀態(tài)，僅在血清學(xué)試驗時才被發(fā)現(xiàn)。無臨床表現(xiàn)的潛伏梅毒具有隱蔽的特點，容易被本人和醫(yī)生忽視。隱性梅毒通過性傳播感染性伴，及通過胎傳引起先天梅毒，是近十年來梅毒發(fā)病率快速上升的重要原因[1]。

梅毒的實驗室檢查對梅毒的診斷有決定性意義。在孕前優(yōu)生健康檢查項目中進行梅毒的實驗室檢查對預(yù)防先天梅毒具有重要的作用。

梅毒的實驗室診斷方法主要有病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測方法兩大類。其中，血清學(xué)檢測是臨床常用且最重要的檢測方法。

1.梅毒的病原學(xué)檢查

取疑似梅毒的皮膚、粘膜、淋巴結(jié)等損害處的組織滲出液，暗視野顯微鏡下查找梅毒螺旋體，或?qū)?biāo)本進行鍍銀染色在普通光學(xué)顯微鏡下檢查，或檢測標(biāo)本中是否含有梅毒螺旋體DNA或抗原存在，均屬于病原學(xué)檢查范疇。病原學(xué)檢查陽性，能確認(rèn)梅毒。

由于梅毒病程本身的特點，僅部分患者有皮膚粘膜損害，而且在不同病程階段的皮損中，病原體檢出的機率變化較大。隱性梅毒患者沒有皮損可供檢查。所以，病原學(xué)檢查不是基層適宜的常規(guī)檢驗技術(shù)。

2.梅毒血清學(xué)試驗

梅毒血清學(xué)試驗是指檢測患者血中梅毒螺旋體抗體的一類試驗的總稱。

當(dāng)人體感染梅毒螺旋體3~4周左右，患者血中可出現(xiàn)相應(yīng)的抗體。這些抗體可分為兩類：一類被稱為反應(yīng)素，可與心磷脂等類脂質(zhì)反應(yīng)。目前，對反應(yīng)素的本質(zhì)尚有爭議。一般認(rèn)為它所針對的抗原為宿主組織受破壞后所釋放出的心磷脂，因此抗體的出現(xiàn)反映了宿主組織受到破壞的情況，少數(shù)情況下這類抗體在紅斑狼瘡等其它以慢性結(jié)締組織損害為特征的疾病時也可以出現(xiàn)。梅毒經(jīng)治療后，反應(yīng)素可逐漸減少或消失。因此，檢測反應(yīng)素的試驗可用于療效觀察及作為判愈指標(biāo)，該類試驗稱為非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，如RPR，TRUST等。

另一類抗體為梅毒螺旋體特異性抗體，這類抗體可與梅毒螺旋體特有的抗原成分進行反應(yīng)。對大多數(shù)梅毒患者而言，不論其治療與否或疾病的活動性如何，該類抗體可持續(xù)終身陽性。所以，檢測該類抗體的試驗可進行梅毒的確認(rèn)，該類試驗被稱為梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，如TP-ELISA，TPHA，TPPA等

2.1非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗

其原理是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇按一定比例的混合物作為抗原，檢測患者血中所對應(yīng)的抗體，可用于梅毒的初篩。目前，臨床常用的方法為快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）及甲苯胺紅不加熱血清學(xué)試驗（TRUST）。

RPR與TRUST試劑的主要成分相同，試驗原理一致，操作方法相似。其區(qū)別僅在于RPR用碳顆粒作為凝集指示劑，凝集時出現(xiàn)黑色絮狀沉淀；TRUST用一種染料——甲苯胺紅作為指示劑，凝集時出現(xiàn)紅色絮狀沉淀。

兩種試劑的敏感性及特異性相似，可任選其中一種進行使用。

優(yōu)點：試劑成本低廉。

缺點：需要配備一定的儀器設(shè)備，尤其是RPR或TRUST試驗專用的水平旋轉(zhuǎn)儀。水平旋轉(zhuǎn)儀的要求為旋轉(zhuǎn)環(huán)狀直徑為2cm，速度為（100±5）r/min。

2.1.1.定量試驗的重要性

定性試驗：取患者血漿或血清50ul與RPR或TRUST抗原液50ul震蕩混勻后，觀察有無凝集現(xiàn)象。對定性試驗結(jié)果為陽性的患者，需進一步做定量試驗。

定量試驗：先將患者血清或血漿用生理鹽水進行倍比稀釋，如稀釋成1:2、1:4、1:8……等各個濃度。然后各取50ul，分別與RPR或TRUST抗原液50ul震蕩混勻后，觀察各個稀釋濃度血清的凝集情況。這是一種半定量測定患者血中反應(yīng)素濃度的試驗。

對定性試驗結(jié)果為陰性的標(biāo)本，無需再做定量試驗，報告結(jié)果為RPR或TRUST陰性；對定性試驗結(jié)果為陽性的標(biāo)本，應(yīng)進一步做定量試驗，報告結(jié)果時附上該標(biāo)本能出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的最高稀釋倍數(shù)，也稱滴度，如RPR陽性（滴度1:32）。

對于非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，定性結(jié)果為陽性的患者，進一步做定量試驗的重要意義在于，RPR或TRUST滴度的變化將作為以后觀察治療效果的指標(biāo)。由于很多梅毒患者沒有任何臨床表現(xiàn)，且即使有臨床癥狀體征，也可以不經(jīng)治療而自行消退。所以，梅毒療效的觀察不以臨床表現(xiàn)為準(zhǔn)。RPR或TRUST的滴度變化能比較準(zhǔn)確地反映治療效果。梅毒患者經(jīng)有效治療后，RPR或TRUST滴度應(yīng)逐漸下降以至轉(zhuǎn)為陰性。梅毒復(fù)發(fā)或再感染時，RPR滴度可反彈升高，或由陰轉(zhuǎn)陽。

梅毒患者經(jīng)治療后，觀察6-12個月，RPR或TRUST滴度應(yīng)下降4倍以上（即相差兩個倍比稀釋度，如RPR滴度從1:32降至1:16，再降至1:8），為治療有效的表現(xiàn)。

部分梅毒患者經(jīng)治療后，RPR或TRUST滴度下降但未轉(zhuǎn)陰，長期維持在較低滴度水平，這種現(xiàn)象稱血清固定。即使給予再次治療，也不能使其滴度下降。該類患者可長期隨防，若RPR滴度無反彈升高，則無需再次治療。如果RPR試驗由陰性轉(zhuǎn)為陽性或滴度升高4倍以上（如1:2升至1:8以上），應(yīng)考慮血清復(fù)發(fā)或再感染的可能性。此外，也應(yīng)排除無癥狀神經(jīng)梅毒的可能性。

有的患者首次發(fā)現(xiàn)梅毒而就診時的RPR滴度就比較低，尤其常見于老年無癥狀患者，經(jīng)抗梅毒治療后，RPR滴度不進一步降低。這種患者多為晚期潛伏梅毒，或是因其它疾病用藥時，無意中已經(jīng)對梅毒進行過治療。對這類患者可長期隨防觀察而無需進一步治療。

有些梅毒患者血清中存在高濃度抗體，在進行RPR試驗時，因血清中抗體濃度大于RPR抗原濃度，兩者比例不適合，而使RPR定性試驗結(jié)果呈現(xiàn)假陰性，這種現(xiàn)象稱為“前帶現(xiàn)象”。此時，應(yīng)將血清做系列稀釋后再進行試驗，即會出現(xiàn)陽性結(jié)果。

為了避免實驗室之間誤差的影響，應(yīng)當(dāng)在同一實驗室采用同一種方法（如均為RPR試驗）的檢測結(jié)果進行前后比較，觀察治療效果。

2.2梅毒螺旋體血清學(xué)試驗

這類試驗以梅毒螺旋體特異性蛋白成分作為抗原，檢測患者血中對應(yīng)的梅毒螺旋體的特異性抗體，可用做確證試驗。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的方法學(xué)不同，可分為顆粒凝集試驗（如TPHA、TPPA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（如TP-ELISA），免疫層析法（如“膠體金法”、“膠體硒法”），免疫印跡試驗（WB試驗）、間接免疫熒光法（如FTA-ABS）等。其中，前三種試驗是目前常用的方法，下面就這三類試驗進行介紹。

2.2.1顆粒凝集試驗

將梅毒螺旋體特異性蛋白成分作為抗原，包被吸附在微小顆粒載體上，稱之為致敏顆粒。當(dāng)致敏顆粒與血清中梅毒抗體相遇時，由于抗原抗體結(jié)合所產(chǎn)生的交叉聯(lián)接作用，產(chǎn)生肉眼可見的顆粒凝集現(xiàn)象。

最早用于做載體的顆粒是經(jīng)醛化處理過的羊紅細(xì)胞或雞紅細(xì)胞，故稱為血球凝集試驗（TPHA）。由于動物的紅細(xì)胞穩(wěn)定性不好，批間差較大，有生物抗原性等原因，紅細(xì)胞逐漸被其它性能更好的人工合成的聚合物載體顆粒所取代。

用人工合成的明膠顆粒作為載體的試驗，稱為明膠顆粒凝集試驗（TPPA）。這是目前各醫(yī)院常用的方法。

用人工合成的乳膠顆粒作為載體的試驗，稱為乳膠顆粒凝集試驗（TPLA），國內(nèi)用戶較少。

該類試驗的優(yōu)點：無需配套大型儀器設(shè)備，可以手工完成整個過程。

缺點：操作過程略繁瑣，報告結(jié)果約需2個小時；更適合多人份標(biāo)本的檢測，檢測單人份標(biāo)本時稍顯不便；用肉眼判讀結(jié)果，可能出現(xiàn)主觀誤差，檢驗人員需有一定經(jīng)驗。

2.2.2酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是臨床檢驗中常用的一類免疫分析技術(shù)。將該技術(shù)應(yīng)用在檢測梅毒螺旋體特異性抗體時，稱為TP-ELISA試驗。

近年來，隨著新技術(shù)的不斷進步，在ELISA技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，時間分辨熒光免疫分析技術(shù)，也正在逐漸被臨床檢驗所采用。

該類方法的優(yōu)點：多由儀器自動完成操作，檢測過程自動化，檢測結(jié)果數(shù)據(jù)化，特別適合大規(guī)模標(biāo)本的檢測。

該類方法的缺點：不適合單人份標(biāo)本的檢測，需配套相應(yīng)的大型儀器設(shè)備。這類試驗的分析靈敏度較高，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

目前，該類檢測方法多用于較大的綜合性醫(yī)院，對基層單位不太合適。

2.2.3免疫層析法

免疫層析試驗是一種常用的固相膜免疫測定法。

目前，應(yīng)用該技術(shù)進行梅毒特異性抗體檢測的商品化試劑中，根據(jù)其標(biāo)記抗原抗體所用的顯色顆粒的不同，又可分為膠體金法、膠體硒法、乳膠法等。

上述試劑的檢測原理相同，操作過程相似。該類試劑具有操作簡便快捷，對檢驗人員的技術(shù)要求較低，操作過程中無需特殊的輔助儀器，有的試劑可以用指尖末梢全血做為標(biāo)本等優(yōu)點，尤其適合基層單位使用。

3.梅毒血清學(xué)試驗的合理應(yīng)用

非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗在梅毒極早期及晚期可呈陰性，已治愈的梅毒可呈陰性；在紅斑狼瘡等其它疾病時可呈生物學(xué)假陽性。如果僅用非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，則容易漏檢或誤診梅毒患者。

梅毒螺旋體血清學(xué)試驗幾乎可將所有感染過梅毒的患者均檢測出來，但它不能區(qū)分已治愈的梅毒和未治療的現(xiàn)癥感染者。

為了準(zhǔn)確診斷梅毒，這兩類試驗應(yīng)當(dāng)同時進行，檢測結(jié)果還需結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、病史及治療史，甚至性伴侶的病史、治療史等因素，才能綜合正確判斷[2]。

若將非梅毒螺旋體試驗以RPR結(jié)果為例，梅毒螺旋體血清學(xué)試驗以TPPA結(jié)果為例，梅毒血清學(xué)檢測有4種可能出現(xiàn)的結(jié)果：

①RPR陽性，TPPA陰性：多為RPR假陽性。

②RPR陽性，TPPA陽性：現(xiàn)癥梅毒；已治療過的梅毒，但RPR尚未轉(zhuǎn)陰。

③RPR陰性，TPPA陽性：已治愈的梅毒；極早期的梅毒；極晚期的梅毒；RPR試驗“前帶現(xiàn)象”。

④RPR陰性，TPPA陰性：排除梅毒感染；極早期的梅毒，尚無可檢測到的抗體產(chǎn)生；極晚期的梅毒；合并艾滋病的梅毒。

神經(jīng)梅毒的診斷應(yīng)結(jié)合腦脊液的檢查結(jié)果及神經(jīng)系統(tǒng)的臨床癥狀體征，胎傳先天梅毒的診斷應(yīng)結(jié)合懷孕期間孕婦的治療史及新生兒出生后多次梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果的變化情況進行綜合判斷。這兩種梅毒的診斷較復(fù)雜，應(yīng)由專業(yè)的性病防治機構(gòu)來進行，此文中不再贅述。

4.基層單位在梅毒檢驗中常見的不足之處

由于梅毒的實驗室診斷相對復(fù)雜，不易被基層醫(yī)療單位完全正確掌握運用，基層單位在梅毒檢查中常有如下不足之處：①只做非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，如RPR，未同時進行梅毒螺旋體血清學(xué)試驗；②只做非梅毒螺旋體血清學(xué)定性試驗，陽性時不進一步做定量試驗，如只報RPR陽性，沒有滴度；③只做梅毒螺旋體血清學(xué)試驗，如TP-ELISA，不做非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗。

針對上述情況，如果工作條件確實有限，不能同時進行兩類試驗，可優(yōu)先考慮選用梅毒螺旋體血清學(xué)試驗來進行篩查，這樣能將治療或未治療的梅毒患者均檢測出來。對檢測結(jié)果為陽性的患者再轉(zhuǎn)診至專業(yè)的性病防治機構(gòu)進行進一步診斷，并給予相應(yīng)的治療。這種方案比只用非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗（如RPR）來進行篩查的實際效果可能更利于梅毒的防治。

國外已有將兩類試驗合并在一起進行檢測的商品化試劑，方法均為免疫層析法。除可用血清、血漿、全血做標(biāo)本之外，還可以用唾液做為標(biāo)本[3]。將來，對這類試劑的開發(fā)及推廣應(yīng)用將為基層衛(wèi)生和計生服務(wù)機構(gòu)進行梅毒的篩查帶來更簡便快捷、更容易掌握的新方法。